효소의 활성 측정(measurement)
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작성일 23-02-25 18:27
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4) 두 가지 용액을 섞자마자 timer로 거품이 시험관을 넘치기 직전까지 시간을 재고 기록한다.
2) substrate solution : 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 % H2O2 solution with 0.25% SDS and 1% glycerol
3) buffer solution : 50 mM Na-phosphate solution (pH 4, 5, 6, 7, 8, 9)
3) 실온에서 1 ml의 20% H2O2 solution with 0.25% SDS and 1% glycerol를 준비된 시험관에 넣고 timer로 거품이 시험관을 넘치기 직전까지 시간을 재고 기록한다.
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1. 도구 및 방법
가) 실험 도구
설명
1) 준비된 효소액 10 ml을 최적의 pH의 완충용액 10 ml과 섞은 후 實驗(실험) 2에서 알게된 최적의 온도를 나타내는 incubator에 넣고 5 분간 기다린다. 조교는 각 조별로 實驗(실험)할 pH를 지정한다.
4) 기질용액과 효소액을 섞고 지정된 온도에서 반응시킨다. 두 용액을 섞은 직후부터 거품이 시험관에 넘치기 직전까지의 시간을 측정(測定) 한다.
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2) 준비된 효소액 동량 1 ml을 여러 pH 완충용액 1 ml과 섞는다.
4) 얼음, room temperature, 37 oC, 50 oC, 65 oC, boiling water.
효소,중간,기말,결과,
1) 준비된 카탈라제 효소액 1 ml을 實驗(실험) 1에서 가장 높은 활성도를 나타낸 pH의 완충용액 1 ml 과 섞는다.
순서
2) 조교는 각 조별로 實驗(실험)할 기질을 지정한다 (5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 % H2O2 solution with 0.25% SDS and 1% glycerol).
나) 實驗(실험) 방법
1) sliced potato for catalase extract
3) 각 조는 1 ml의 기질용액을 15 ml 시험관에 넣은 후 효소액이 있는 incubator에 5 분간 넣고 기다린다. 3) buffer solution : 50 mM Na-phosphate solution (pH 4, 5, 6, 7, 8, 9) 4) 얼음, room temperature, 37 oC, 50 oC, 65 oC, boiling water. 5) 15 ml test tube, timer
1. pH 변화에 따른 효소의 활성도 점검
1) 감자를 강판에 갈아서 거즈로 걸러 카탈라제 효소액을 마련한다.
2. 온도 변화에 따른 효소의 활성도 점검
다.
2) 조교는 각 조별로 반응시킬 온도를 정해 준다. 5) 15 ml test tube, timer
1. 도구 및 방법 가) 실험 도구 1) sliced potato for catalase extract 2) substrate solution : 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 % H2O2 solution with 0.25% SDS and 1% glycerol * BSA (Bovine Serum Albumin, Sigma)을 농도가 1 mg/ml이 되게 만든다.
효소의 활성 측정(measurement)
3) 1 ml의 20% H2O2 solution with 0.25% SDS and 1% glycerol를 준비된 시험관에 넣고 지정된 온도에서 5분간 온도를 맞추기 위해 넣은 후 기다린다.
3. Enzyme kinetics analysis
* BSA (Bovine Serum Albumin, Sigma)을 농도가 1 mg/ml이 되게 만든다. 이때 효소액 역시 지정된 온도에서 5 분간 기질용액과 섞기 전까지 온도를 맞춘다.
